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液相色谱仪的分离方法以及操作过程

发布时间:2014-06-26 点击量:2933

 

液相色谱仪的操作过程

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography,HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighSpeedLiquidChromatography,HSLP)。也称现代液相色谱。

液相色谱仪的操作过程如下:

   1.  翻开HPLC工作站(包含计算机软件和色谱仪),衔接好活动相管道,衔接检测体系。

   2. 对抽滤后的活动相进行超声脱气10-20分钟。

  3.过滤活动相,根据需求挑选不一样的滤膜。

  4进入HPLC操控界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。

  5. 有一段时刻没用,或许换了新的活动相,需求先冲刷泵和进样阀。冲刷泵,直接在泵的出水    口,用针头抽取。冲刷进样阀,需求在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲刷时速度不要超越10ml/min。

  6. 调理流量,初度运用新的活动相,能够先试一下压力,流速越大,压力越大,通常不要超越2000。点击injure,选用适宜的流速,点击on,走基线,调查基线的状况。

  7. 规划走样办法。点击file,选择select?users?and?methods,能够选择现有的各种走样办法。若需树立一个新的办法,点击new?method。选择需求的配件,包含进样阀,泵,检测器等,根据需求而不一样。选完后,点击protocol。一个完整的走样办法需求包含:a.进样前的稳流,通常2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject变换;d.走样时刻,随不一样的样品而不一样。

  8. 进样和进样后操作。选定走样办法,点击start。进样,一切的样品均需过滤。办法走完后,点击postrun,可记载数据和做符号等。悉数样品走完后,再用上面的办法走一段基线,洗掉剩余物。

  9 关机时,先关计算机,再关液相色谱。

液相色谱仪的分离方法:

色谱法的分离原理是:

溶于流动相(phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从定相中流出。又称为色层法、层析法。

 

色谱法zui早是由俄国植物学家茨维特(Tswett)在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的,色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

 

 

 

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